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血球計數板介紹用優(yōu)質(zhì)厚玻璃制成。每塊計數板由H形凹槽分為2個(gè)同樣的計數池。計數池兩側各有***支持柱,將特制的用蓋玻片覆蓋其上,形成高0.10mm的計數池。計數池畫(huà)有長(cháng)、寬各3.0mm的方格,分為9個(gè)大方格,每個(gè)大格面積為1.0mm。容積為0.1mm3(ul),其中,大方格用雙線(xiàn)分成25個(gè)中方格,位于正中及四角5個(gè)中方格是紅細胞計數區域,用單線(xiàn)劃分為16個(gè)小方格。
四角的4個(gè)大方格是白細胞計數區域,用單線(xiàn)劃分為16個(gè)中方格。根椐***際標準局(NBS)規定,大方格每邊長(cháng)度允許誤差為±1%。
使用方法:
1.視待測菌懸液濃度,加無(wú)菌水適當稀釋?zhuān)ㄐ泵?**般稀釋100倍),以每小格的菌數可數為度。
2.取潔凈的血球計數板***塊,在計數區上蓋上***塊蓋玻片。
3.將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計數板中間平臺兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入***小滴(不宜過(guò)多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿(mǎn)計數區,勿使氣泡產(chǎn)生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上(不要使計數區兩邊平臺沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計數區深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)。
4.靜置片刻,使細胞沉降到計數板上,不再隨液體漂移。將血球計數板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩,先在低倍鏡下找到計數區后,再轉換高倍鏡觀(guān)察并計數。由于細胞的折光率和水的折光率相近,觀(guān)察時(shí)應減弱光照的強度。
5.25個(gè)大方格組成的計數區,除數上述四個(gè)大方格外,還需數1個(gè)大方格的菌數(即80個(gè)小格)。為了保證計數的準確性,避免重復計數和漏記,在計數時(shí),對沉降在格線(xiàn)上的細胞的統計應有統***的規定。如菌體位于大方格的雙線(xiàn)上,計數時(shí)則數上線(xiàn)不數下線(xiàn),數左線(xiàn)不數右線(xiàn),以減少誤差。即位于本格上線(xiàn)和左線(xiàn)上的細胞計入本格,本格的下線(xiàn)和右線(xiàn)上的細胞按規定計入相應的格中。
6.對于出芽的酵母菌,芽體達到母細胞大小***半時(shí),即可作為兩個(gè)菌體計算。每個(gè)樣品重復計數2-3次(每次數值不應相差過(guò)大,否則應重新操作),按公式計算出每mL(g)菌懸液所含細胞數量。
7.測數完畢,取下蓋玻片,用水將血球計數板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機吹干,放入盒內保存。