作為制備靶向治療藥物的一種方法,克隆細胞系的發(fā)展已經(jīng)越來(lái)越受到重視和投入,然而面對單細胞克隆日益增長(cháng)的實(shí)驗需求, 目前常用的實(shí)現方法都不盡如人意。 通過(guò)有限稀釋和顯微鏡操作,或利用像流式細胞儀這類(lèi)的自動(dòng)化設備進(jìn)行細胞的篩選和分離,數量少且非常耗費時(shí)間和精力,缺少克隆性的依據,細胞存活率低,不能有效處理小批量樣本,且具有較高的交叉污染風(fēng)險。這些設備的采購和運營(yíng)成本較高,但卻缺乏證實(shí)克隆來(lái)自單細胞的證明。
德國cytena公司開(kāi)發(fā)的單細胞打印機(CloneSelect SCP)則有效解決了這一問(wèn)題。這款產(chǎn)品技術(shù)將細胞檢測傳感器和按需滴定印刷技術(shù)相結合。過(guò)程類(lèi)似于傳統的噴墨打印機。通過(guò)在細胞輕輕的沉積在孔板之前篩選出單個(gè)細胞和細胞形態(tài),確保細胞的活力;使用無(wú)菌的,一次性的打印墨盒避免了交叉污染;在沉積的過(guò)程中,提供單細胞的圖像,為用戶(hù)提供了他們的細胞系是來(lái)自于單克隆的證據,符合FDA對單抗的生產(chǎn)需證實(shí)來(lái)自于單個(gè)細胞的要求,大大提升藥品的開(kāi)發(fā)進(jìn)程。
Cytena開(kāi)發(fā)的克隆篩選單細胞打印機是臺式的自動(dòng)化的實(shí)驗室設備,由于軟件采用直觀(guān),友好的界面設計,所以無(wú)需特別的經(jīng)驗,實(shí)驗室的任何成員都可以進(jìn)行操作 ,設備的操作設置簡(jiǎn)單快速,分離一塊含單細胞的96孔板只需幾分鐘時(shí)間。
克隆篩選單細胞打印機工作原理:
SCP技術(shù)基于頂端的透明微型分配芯片,用于從細胞懸浮中按需生成微滴。分配器芯片是一個(gè)包含微流體結構的硅玻璃化合物,被稱(chēng)為劑量室的背面有一個(gè)硅膜(圖b),它被一個(gè)壓電板制動(dòng)器所擠壓偏轉,這種擠壓偏轉導致腔體內的液體位移,液滴從噴嘴噴出來(lái)。根據流體的物理性質(zhì)和壓電控制參數,可以使用直徑為40μm的噴嘴,將液滴體積控制在100 pL至250 pL的范圍內。
芯片連接到儲存器,可以裝載體積為5至100μL的細胞懸浮液。通過(guò)簡(jiǎn)單的手動(dòng)上樣法將細胞懸浮液裝載到容器中來(lái),芯片通過(guò)毛細管力自我填充,因此可以在樣品加載后直接打印。
技術(shù)亮點(diǎn):
單細胞的證據可追溯性
在cartridge分離細胞前后的過(guò)程中,會(huì )連續拍取多張細胞圖片,證實(shí)克隆來(lái)自于單個(gè)細胞。這些圖片會(huì )根據孔板的位置進(jìn)行命名,并存儲在硬盤(pán)中,以便追蹤。
單細胞打印效率高,且適用于多個(gè)細胞系
CloneSelect SCP打印效率普遍高于96%,有的細胞甚至達到100。分離快速,一個(gè)96孔板只需2-3min,且每個(gè)孔都有多張圖片證實(shí)為單細胞,該技術(shù)已經(jīng)應用于在多種細胞的單細胞分離如CHO, HEK,Hela,L929,U2OS等。
細胞無(wú)損傷,單細胞存活率高
細胞無(wú)需標記染色,沒(méi)有激光損傷,沒(méi)有電壓的影響,直接采用 catridge進(jìn)行分離,所以細胞沒(méi)有任何損傷,分離后的細胞存活率高,克隆恢復率高。
應用領(lǐng)域
單克隆篩選
單細胞基因組學(xué)
單細胞PCR
稀有細胞的分離
應用案例
克隆細胞系開(kāi)發(fā)在單抗領(lǐng)域是一個(gè)至關(guān)重要的環(huán)節?,F有的細胞系開(kāi)發(fā)流程存在很多弊端如缺乏單克隆證據,單細胞分離效率低下,單細胞存活率低等。
SCP技術(shù)不僅能快速有效的分離單細胞,還能提供單克隆來(lái)源的證據,且保證細胞高的存活率以及0風(fēng)險的交叉污染。單細胞打印機SCP支持96孔和384孔板,已經(jīng)成功應用于一系列典型的細胞系如CHO, U2OS,HEK293, L929,Hela細胞等。
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