安捷倫液相色譜柱選擇指南
1.色譜柱的構造
色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成，壓力不高于70 kg/cm2 時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內壁要求有很高的光潔度。為提高柱效，減小管壁效應，不銹鋼柱內壁多經(jīng)過(guò)拋光。也有人在不銹鋼柱內壁涂敷氟塑料以提高內壁的光潔度，其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的，用于細管柱。色譜柱兩端的柱接頭內裝有篩板，是燒結不銹鋼或鈦合金，孔徑0.2~20µm（5~10µm），取決于填料粒度，目的是防止填料漏出。
2.色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類(lèi)，尺寸規格也不同：
①常規分析柱（常量柱），內徑2~5mm（常用4.6mm，國內有4mm和5mm），柱長(cháng)10~30cm；
②窄徑柱（narrow bore，又稱(chēng)細管徑柱、半微柱semi-microcolumn），內徑1~2mm，柱長(cháng)10~20cm；
③毛細管柱（又稱(chēng)微柱microcolumn），內徑0.2~0.5mm；
④半制備柱，內徑＞5mm；
⑤實(shí)驗室制備柱，內徑20~40mm，柱長(cháng)10~30cm；
⑥生產(chǎn)制備柱內徑可達幾十厘米。柱內徑一般是根據柱長(cháng)、填料粒徑和折合流速來(lái)確定，目的是為了避免管壁效應。
3.色譜柱的分類(lèi)
常見(jiàn)的分配住填料：碳十八柱（ODS/C18）、碳八柱（MOS/C8）、碳六柱（Hexyl/C6）、 碳四柱（Butyl/C4）、碳一柱（Methyl/C1）、陰離子交換柱（SAX）、 陽(yáng)離子交換柱（SCX）、苯基柱（Phenyl）、氨基柱（Amino/NH2）、 氰基柱（Cyano/CN/Nitrile）
常見(jiàn)的吸附柱填料：硅膠柱
4.正相色譜柱與反相色譜柱的區別
色譜柱的安裝
1、首先應確認柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積，進(jìn)樣閥、柱子、檢測器之間的連接管路內徑盡可能使用內徑較小的管線(xiàn)，同時(shí)控制進(jìn)樣器、色譜柱和檢測器之間連接管線(xiàn)的長(cháng)度。安裝色譜柱之前，確認流路系統中的溶劑是否正常。對分析較復雜的樣品建議安裝保護柱。 2、為了使色譜柱與儀器系統達的連接效果，應盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來(lái)的接頭長(cháng)期匹配其他類(lèi)型的色譜柱，建議在連接新色譜柱前應檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。 3、使用PEEK 材料的通用接頭，只需用手擰緊不需要特定扳手，使用壓力為5000psi；使用溫度不得超過(guò)100℃。
流動(dòng)相平衡：
1、在進(jìn)行樣品檢測前，至少使用20倍柱體積流動(dòng)相使色譜柱充分平衡。流動(dòng)相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應當天配制以保持新鮮避免細菌產(chǎn)生。
2、流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜過(guò)濾,消除流動(dòng)相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動(dòng)相混合后應重新過(guò)濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應使用純水作為流動(dòng)相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5％的有機溶劑沖洗色譜柱，同時(shí)可以達到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。
3、流動(dòng)相需脫氣后使用，可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時(shí)使用的流動(dòng)相與色譜柱保存使用的流動(dòng)相有較大區別，應該使用過(guò)度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過(guò)大或流動(dòng)相緩沖鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長(cháng)的平衡時(shí)間。
樣品制備與操作：
1、樣品應當盡可能溶解在能與流動(dòng)相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。
2、樣品溶液在進(jìn)樣前應使用針頭式過(guò)濾器對樣品預先過(guò)濾。頻繁改變流動(dòng)相組成，會(huì )加速降低柱效。
3、色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得分離效果，使用時(shí)請不要超過(guò)200kgf，而且避免壓力突然上升或變化，否則會(huì )造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外操作溫度不要超過(guò)60℃。
保存色譜柱：
1、如果流動(dòng)相含有酸或無(wú)機鹽，應當先用去離子水（20倍柱體積）沖洗干凈。然后用用100％乙腈或甲醇保存色譜柱。最后用柱子的接頭密封，并放在穩定的環(huán)境中存放。
2、應避免色譜柱受到直接的機械沖擊或摔落，避免造成色譜柱性能的降低。
色譜柱的再生：
用相當于20倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子，建議按柱子的箭頭方向沖洗，盡可能不反沖。沖洗時(shí)使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇。
5.色譜柱發(fā)展方向
因強調分析速度而發(fā)展出短柱，柱長(cháng)3~10cm，填料粒徑2~3µm。為提高分析靈敏度，與質(zhì)譜（MS）聯(lián)接，而發(fā)展出窄徑柱、毛細管柱和內徑小于0.2mm的微徑柱（microbore）。細管徑柱的優(yōu)點(diǎn)是：①節省流動(dòng)相；②靈敏度增加；③樣品量少；④能使用長(cháng)柱達到高分離度；⑤容易控制柱溫；⑥易于實(shí)現LC-MS聯(lián)用。
但由于柱體積越來(lái)越小，柱外效應的影響就更加顯著(zhù)，需要更小池體積的檢測器（甚至采用柱上檢測），更小死體積的柱接頭和連接部件。配套使用的設備應具備如下性能：能精密輸出1~100µl/min的低流量，進(jìn)樣閥能準確、重復地進(jìn)樣微小體積的樣品。且因上樣量小，要求高靈敏度的檢測器，電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜儀在這方面具有突出優(yōu)點(diǎn)。
6.填充和性能評價(jià)
色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外，還與填充技術(shù)有關(guān)。在正常條件下，填料粒度＞20µm時(shí)，干法填充制備柱較為合適；顆粒＜20µm時(shí)，濕法填充較為理想。填充方法一般有4種：①高壓勻漿法，多用于分析柱和小規模制備柱的填充；②徑向加壓法，Waters；③軸向加壓法，主要用于裝填大直徑柱；④干法。柱填充的技術(shù)性很強，大多數實(shí)驗室使用已填充好的商品柱。
必須指出，高效液相色譜柱的獲得，裝填技術(shù)是重要環(huán)節，但根本問(wèn)題還在于填料本身性能的優(yōu)劣，以及配套的色譜儀系統的的結構是否合理。
無(wú)論是自己裝填的還是購買(mǎi)的色譜柱，使用前都要對其性能進(jìn)行考察，使用期間或放置一段時(shí)間后也要重新檢查。柱性能指標包括在一定實(shí)驗條件下（樣品、流動(dòng)相、流速、溫度）下的柱壓、理論塔板高度和塔板數、對稱(chēng)因子、容量因子和選擇性因子的重復性，或分離度。一般說(shuō)來(lái)容量因子和選擇性因子的重復性在±5%或±10%以?xún)?。進(jìn)行柱效比較時(shí)，還要注意柱外效應是否有變化。
一份合格的色譜柱評價(jià)報告應給出柱的基本參數，如柱長(cháng)、內徑、填料的種類(lèi)、粒度、色譜柱的柱效、不對稱(chēng)度和柱壓降等。
7.使用和維護注意事項
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會(huì )降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護色譜柱。
①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì )影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì )沖動(dòng)柱內填料，因此在調節流速時(shí)應該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉動(dòng)不能過(guò)緩（如前所述）。
②應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/span>
③一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì )迅速降低柱效。
④選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預先被硅膠“飽和"，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
⑤避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進(jìn)行預處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。
⑥經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對流路系統中流動(dòng)相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規分析需要50~75ml。
下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液，那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇（乙腈）沖洗時(shí)重復注射100~200µl四氫呋喃數次有助于除去強疏水性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類(lèi)脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。
陽(yáng)離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機物）、甲醇、水依次沖洗。
⑦保存色譜柱時(shí)應將柱內充滿(mǎn)乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間。
⑧色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時(shí)應更換濾片或將其取出進(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。
在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開(kāi)柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相（與柱內相同）填滿(mǎn)色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護、延長(cháng)柱壽命的作用。采用保護柱會(huì )損失一定的柱效，這是值得的。
通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內使用。柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著(zhù)在柱頂的填料上。新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補加填料使柱效恢復。
每次工作完后，用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線(xiàn)平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會(huì )腐蝕不銹鋼管道，不宜長(cháng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應每隔4~5天開(kāi)機沖洗15分鐘。
安捷倫公司簡(jiǎn)介
安捷倫科技有限公司是一家多元化的高科技跨國公司，它于1999年從惠普研發(fā)有限合伙公司分離出來(lái)，主要致力于通訊和生命科學(xué)兩個(gè)領(lǐng)域內產(chǎn)品的研制開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)銷(xiāo)售和技術(shù)服務(wù)等工作。
安捷倫科技有限公司是分析儀器系統的供應商，其產(chǎn)品正在化學(xué)、環(huán)保、食品、醫藥和生命科學(xué)領(lǐng)域中廣泛使用。安捷倫具有*的化學(xué)分析儀器，豐富的法規適應性和專(zhuān)業(yè)技術(shù)經(jīng)驗，以及優(yōu)良的支持服務(wù)系統，這些都能夠幫助您的實(shí)驗室超前應對分析的挑戰。
創(chuàng )始人 威廉·休利特和戴維·帕卡德
年凈收入 51億美元（？年）
員工人數 20,000（？年）
總裁兼執行官 邵律文[William P. （Bill） Sullivan]
總部所在地 美國加利福尼亞州 Santa Clara
電子測量
安捷倫的電子測量業(yè)務(wù)為客戶(hù)提供量身定制的、標準的電子電子測量?jì)x器和系統，通信網(wǎng)絡(luò )和服務(wù)的監測、管理和優(yōu)化工具，以及用于電子設備和通信網(wǎng)絡(luò )和服務(wù)設計、開(kāi)發(fā)、制造、安裝、部署和運營(yíng)方面的軟件設計工具和相關(guān)服務(wù)。截至2005年10月31日，我們在電子測量業(yè)務(wù)領(lǐng)域的員工約為11,500。
市場(chǎng)：安捷倫的電子測量業(yè)務(wù)所涉及的市場(chǎng)包括通信測試和綜合測試。
產(chǎn)品領(lǐng)域：通信測試產(chǎn)品包括為下列類(lèi)型的網(wǎng)絡(luò )和系統提供的產(chǎn)品：光線(xiàn)網(wǎng)絡(luò )、傳輸網(wǎng)絡(luò )、寬帶和數據網(wǎng)絡(luò )、無(wú)線(xiàn)通信和微波網(wǎng)絡(luò )。安捷倫還對安裝、維護和運營(yíng)支持系統提供幫助。綜合測試產(chǎn)品包括綜合儀器、模塊儀器和測試軟件、數字設計產(chǎn)品、參數測試產(chǎn)品、高頻電子設計工具、電子制造測試設備和薄膜電晶體陣列測試設備。
生物分析測量
安捷倫的生物分析測量業(yè)務(wù)提供以應用為中心的解決方案，其中包括能夠讓用戶(hù)識別、量化和分析物質(zhì)和產(chǎn)品的物理和化學(xué)屬性的儀器、軟件、耗材和服務(wù)。截至2005年10月31日，我們在生物分析測量業(yè)務(wù)領(lǐng)域的員工約為4,000名。
市場(chǎng)：生物分析測量業(yè)務(wù)所涉及的市場(chǎng)包括生命科學(xué)，其中包括藥物分析、基因表達和蛋白質(zhì)組市場(chǎng)，以及化學(xué)分析，其中包括石化、環(huán)保、國土安全、法醫、生物農業(yè)以及食品安全市場(chǎng)。
產(chǎn)品領(lǐng)域：生物分析測量業(yè)務(wù)的七大主要產(chǎn)品包括：微陣列、微流體、氣相色譜、液相色譜、質(zhì)譜、軟件和信息學(xué)、以及相關(guān)耗材、試劑和服務(wù)。
安捷倫實(shí)驗室
安捷倫實(shí)驗室是安捷倫的中心研究機構，總部位于美國加利福尼亞州Santa Clara，并在中國北京、美國華盛頓州Everett、比利時(shí)Leuven、以及英國蘇格蘭South Queensferry設有分支機構。安捷倫實(shí)驗室主要致力于從事兩大類(lèi)型的研究：
1）針對能夠轉化為我們在通信、電子、生命科學(xué)和化學(xué)分析領(lǐng)域的現有業(yè)務(wù)的技術(shù)而進(jìn)行的應用型研究
2）針對創(chuàng )造在我們目前的市場(chǎng)之外，但屬于我們所關(guān)心領(lǐng)域的新業(yè)務(wù)而進(jìn)行的研究。安捷倫實(shí)驗室同時(shí)也提供跨公司各個(gè)部門(mén)的技術(shù)整合。
安捷倫銷(xiāo)售和支持
主要通過(guò)直銷(xiāo)的方式銷(xiāo)售產(chǎn)品，但也同時(shí)通過(guò)分銷(xiāo)商、轉銷(xiāo)商、制造商代表、電話(huà)銷(xiāo)售和電子商務(wù)的方式進(jìn)行銷(xiāo)售。
安捷倫液相色譜柱的優(yōu)勢
作為大的測試測量公司，為您提供的不僅僅是基本產(chǎn)品， 更有重現的結果
無(wú)論是研究工作還是常規的QA/QC檢測，安捷倫都有一種ZORBAX HPLC柱為您提供解決方案，幫助您更好地進(jìn)行特定的檢測和純化應用。 安捷倫的ZORBAX色譜柱品種繁多，包括 Rapid Resolution HT （1.8 µm） 和Rapid Resolution （3.5 µm） ，于高通量分析。 有適用于蛋白組學(xué)分離的色譜柱，也有適用于放大純化規模的色譜柱，共有800多種選擇，覆蓋了各種應用范圍和條件，能夠滿(mǎn)足各類(lèi)分析應用的需求。
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紡織服裝機械網(wǎng)