BD FACSAria Fusion 流式細胞儀

BD FACSAria™ Fusion 流式細胞儀具有的多色性能，操作簡(jiǎn)單。早在2003年BD FACSAria™ 問(wèn)世。如今，其杰出的分選性能和生物安方案結合。BA FACSAria™ Fusion配備的生物安全柜可以保護實(shí)驗樣本以及操作者的安全，而這，也正是生物安全的國際標準。

概述

集安全、高性能、分選于一體

BD FACSAria Fusion所配的生物安全柜嚴格按照Class II Type A2生物安全等級設計，符合美國國家衛生基金會(huì )InternationalStandard 49、歐洲European Standard 12469和澳大利亞Australian Standard AS 2252.2–2009等一系列國際生物安全標準。同時(shí)，BD FACSAria Fusion還提供不帶生物安全柜的配置，并可以在以后需要的時(shí)候很方便的現場(chǎng)升級安裝。

為了進(jìn)一步提高生物安全防護，BD FACSAria Fusion 采用了諸多雙重保險設計，將操作者可能受到的暴露風(fēng)險減少至。例如，在生物安全柜保護操作者免受分選產(chǎn)生的氣溶膠危害的同時(shí)，一個(gè)內置的氣溶膠控制系統（AMS）可以幫助排除氣溶膠，而且AMS與生物安全柜獨立工作，更加提高了生物安全性。

為了達到無(wú)以倫比的靈敏度和分辨率，BDFACSAria Fustion設計了精確集成的液流系統和光學(xué)系統，以達到的信號檢測。在多色實(shí)驗中，優(yōu)化的光纖引導的激光使每個(gè)熒光通道的檢測靈敏度和分辨率得到進(jìn)一步提升。的流動(dòng)室技術(shù)和光膠耦合石英杯確保了高性能、高安全性和高簡(jiǎn)便性。BD FACSAria Fusion使原本復雜的細胞分選實(shí)驗變得很簡(jiǎn)單，從而服務(wù)于更多的研究者和應用領(lǐng)域。

液流系統

高靈敏度的多色分析和分選應用

從穩定性流動(dòng)室技術(shù)到穩定性光路設計，再到軟件操控的儀器設置和操作， BD FACSAria Fusion實(shí)現了簡(jiǎn)單高效的細胞分析和分選。

光膠耦合的石英杯流動(dòng)室

BD FACSAria Fusion的核心是的新一代方形石英杯流動(dòng)室，它與激光器、光膠耦合的熒光收集光路一起構成了一套真正意義的穩定性光路系統。BD的石英杯設計確保激光精確聚焦到樣本流上，不僅能使樣本能獲得的激發(fā)效率，同時(shí)還能使發(fā)射光信號得到的收集。

穩定性光路不但大大縮短了開(kāi)機啟動(dòng)時(shí)間，也提高了實(shí)驗間以及不同操作者間的可重復性，并且實(shí)現了每日質(zhì)控的自動(dòng)化。更重要的是，它還提高了熒光收集效率并優(yōu)化了分辨率，因此特別適合多色應用的需求，甚至在高速分選時(shí)同樣具有高靈敏度和分辨率。

此外，BD FACSAria Fusion的新一代流動(dòng)室設計進(jìn)一步提高了側群細胞 (SP) 應用和細胞DNA周期分析實(shí)驗的分辨率。

高性能分析，高性能分選

BD FACSAria Fusion的分析性能和熒光檢測靈敏度比肩水平的專(zhuān)業(yè)分析型儀器。這是因為其運用了與BD FACSCanto™、BD FACSVerse™以及BD LSRFortessa™相同的光膠耦合石英杯和穩定性的光路結構。

這種流動(dòng)池和噴嘴的設計可以達到高數值孔徑的光信號收集。細胞或顆粒以低速通過(guò)分析區域以便收集更多的光信號，之后包裹著(zhù)細胞或顆粒的液流在通過(guò)噴嘴后加速，從而確保高性能細胞分選的實(shí)現。

在傳統的空氣激發(fā)系統中，對顆粒進(jìn)行分析和分選時(shí)的速度是相同的，與之相比，具備了精密配合的光學(xué)和液流系統的BD FACS Fusion表現出更*的光學(xué)檢測靈敏度。

更好的生物安全保障

穩定性光路以及軟件操控的設計減少了操作者與儀器之間直接接觸的頻率，這也為操作者提供了更好的生物安全保障。

高靈敏檢測弱表達細胞群

BD FACSAria Fusion對于光學(xué)系統的不斷改進(jìn)將熒光檢測靈敏度提高到的水平。專(zhuān)門(mén)為優(yōu)化信噪比而選擇的全新激光器進(jìn)一步提高了對弱表達細胞群的檢測分辨率，確保目標細胞分選時(shí)圈門(mén)更加便捷、準確。新激光器的優(yōu)異性能使得弱表達細胞群發(fā)出更亮的熒光，從而便于被分析及后續的圈門(mén)分選。

適應不同大小顆粒的噴嘴

不同尺寸的噴嘴使用戶(hù)可以分選不同大小的樣本顆粒。噴嘴有四種尺寸可選：70μm、85μm、100μm和130μm。噴嘴位于細胞被激光激發(fā)的下方，更換更為方便，安裝位置精確，不會(huì )發(fā)生偏差。這意味著(zhù)在每次插入噴嘴后，可以得到可重復的液滴形態(tài)，不需要重新調節儀器設置，使儀器具有可重復的設置和校正狀態(tài)。軟件中包括了不同噴嘴的特異分選設置，使壓力及分選設置與使用的噴嘴相匹配。

BD FACS™ Accudrop 技術(shù)讓液滴延遲的計算變得簡(jiǎn)單

BD FACS Accudrop技術(shù)簡(jiǎn)化了跌落延遲測定

BD FACS™ Accudrop技術(shù)幫助用戶(hù)查看的下降延遲值。軟件自動(dòng)化簡(jiǎn)化了下降延遲的確定。一旦計算出下降延遲，系統會(huì )自動(dòng)調整以保持一個(gè)恒定的中斷，稱(chēng)為“點(diǎn)"。自動(dòng)堵塞檢測停止分揀，并在檢測到堵塞時(shí)保護收集管。

經(jīng)過(guò)反應杯后，氣流加速通過(guò)噴嘴，形成液滴進(jìn)行分選。由于粒子質(zhì)詢(xún)發(fā)生在噴嘴上方，因此可以在不重新調整光學(xué)元件或流體流的情況下插入和移除噴嘴。

BD FACSAria Fusion 的4個(gè)激光光斑 

方便的鞘液桶和廢液桶

鞘液桶，清洗液桶以及廢液桶都放在系統底部的一個(gè)抽屜里，易于操作。抽屜中包括10L不銹鋼鞘液桶和10L容積的廢液桶，鞘液桶可進(jìn)行高壓。另外，抽屜中還有3個(gè)5L的輔助清潔液桶，用于自動(dòng)無(wú)菌分選液路的處理和儀器關(guān)機。

BD FACSAria Fusion可以連接實(shí)驗室的空氣過(guò)濾和干燥系統，也可以選配壓縮機。

樣本進(jìn)樣倉

在樣本采集期間，進(jìn)樣倉被加壓，使樣本進(jìn)入石英杯檢測流動(dòng)室。樣本進(jìn)樣倉的溫度控制和混勻功能都可以用BD FACSDiva™軟件進(jìn)行調節，從而保證長(cháng)時(shí)間分選時(shí)細胞的活性，并持續細胞的懸浮混勻狀態(tài)。該系統提供從1.0 mL的微量管至15 mL的離心管等多種上樣管固定架。進(jìn)樣端可安裝35 μm和50 μm的樣本濾器，可以在分析和分選過(guò)程中避免管路堵塞。

從分選裝置到收集倉

從樣本進(jìn)樣倉直至分選收集管的封閉管道能夠分離氣溶膠，并且通過(guò)液體抽吸裝置抽空分選裝置中的氣溶膠。分選裝置設計成為固定位置的電偏轉板，能夠對細胞進(jìn)行更高效和重復更好的定向偏轉，并準確進(jìn)入特定的分選收集裝置。

分選倉內安裝有一個(gè)抽吸裝置抽屜，能夠在在分選開(kāi)始前遮蔽分選收集管，并在Sweet Spot軟件監測到堵塞發(fā)生時(shí)自動(dòng)關(guān)閉，以保護樣品收集管和其中的樣品。

分選收集倉的結構設計使得放入樣品收集管基座變得十分方便。收集管基座的設計能夠保證收集管的無(wú)菌狀態(tài)。你還可以選配一個(gè)溫度控制裝置，用以控制樣品收集管或玻片或多孔板的溫度。

方便的無(wú)菌設置和清洗程序

液流系統的創(chuàng )新，如易于插拔的噴嘴，自動(dòng)化的分選設置，易于更換的濾膜等，使儀器設置更為方便和快捷。一體化閥門(mén)組合形成了全新的液流管路。軟件向導使無(wú)菌分選設置更簡(jiǎn)便和高效。此外，在樣本運行后，樣本進(jìn)樣針內外都會(huì )自動(dòng)進(jìn)行沖洗，避免殘留消并除樣本間的交叉污染。

光學(xué)系統

更高效率的多色檢測

BD的在光學(xué)系統方面的革新設計能有效的檢測信號，并在多色檢測中極大的提高每個(gè)通道的靈敏度和分辨率。增強的靈敏度和分辨率意味著(zhù)即便信號很弱的細胞群也可以輕易地被識別和分選。

光學(xué)系統方便優(yōu)化多色檢測和抗體組合的設計，以求達到結果。用戶(hù)可以選擇照射樣本細胞的激發(fā)光波長(cháng)，以及引導散射光和熒光信號通過(guò)特定的濾光片到達檢測器的收集光路。激發(fā)光和收集光路上的創(chuàng )新設計在減小激發(fā)光損失的同時(shí)，也顯著(zhù)改善了信號收集效率，從而使每個(gè)樣本都能獲取得到良好的信號。

激發(fā)光路

激發(fā)光路的組成包括：多根引導光纖、固定波長(cháng)的激光、光束整形裝置和消色差聚焦透鏡。各激光聚焦形成的光斑在空間上相互分離，并各自聚焦成形 (9 x 65 微米)。光斑聚焦越集中，熒光標記的微粒通過(guò)激發(fā)點(diǎn)時(shí)產(chǎn)生的信號就越強。光膠耦合的熒光透鏡能限度的將發(fā)射光從檢測點(diǎn)傳遞給熒光收集光路。由于光路和樣本流均固定，儀器光路的正交在不同實(shí)驗、不同日期間一直保持不變。 手動(dòng)調校光路會(huì )因為每次調校狀態(tài)不同而導致實(shí)驗結果有變化。而固定光路設計避免了這種問(wèn)題，保證儀器光路穩定，對實(shí)驗結果不會(huì )有影響。

八角形檢測器中的光傳播路徑

固定光路保證了實(shí)驗中不會(huì )因光路人為調整而引入的誤差。

收集光路

光纖將發(fā)射光從光膠耦合石英杯傳遞給檢測器接收裝置?；诎私切魏腿切卧O計的收集光路，能限度的檢測來(lái)自每個(gè)激光束照射點(diǎn)的信號，其原理是讓波長(cháng)最長(cháng)的光 (光子能力)優(yōu)先透射進(jìn)入個(gè)光電倍增管 (PMT)，并通過(guò)一系列的長(cháng)通二色分光鏡將較短波長(cháng)的光反射到下一個(gè)PMT檢測器。

這一設計是根據光反射比光透射更有效率這一原理。熒光信號以反射的形式傳播到每一個(gè)PMT檢測器，并在到達檢測器之前只通過(guò)2個(gè)濾片。因此可以在光信號損失最小的情況下完成熒光檢測。

裝置在每個(gè)PMT檢測器之前的帶通濾鏡允許波長(cháng)范圍內的熒光被收集。更重要的是，這種排列簡(jiǎn)化了光學(xué)陣列中濾鏡和分光鏡，濾光片更易更換，而且不需要任何校準就可達到良好的信號強度。

精密的光學(xué)設計

BD FACSAria Fusion光學(xué)系統方面的諸多革新設計，例如的光膠耦合石英杯、八角形檢測器和9 x 65?m大小的光斑，這些革新設計協(xié)同工作，以限度提高檢測靈敏度和分辨率。通過(guò)精密的設計產(chǎn)生出這樣一套更高效的光學(xué)系統，使得其能夠使用較低功率激光，無(wú)需通過(guò)單純提高激光器的功率來(lái)提升實(shí)驗靈敏度和分辨率。而低功率激光又同時(shí)可以降低儀器運作的總體費用。

滿(mǎn)足當前及未來(lái)需求

對于許多用戶(hù)而言，一臺流式的性能高低取決于其靈活性，而靈活性主要表現在能夠同時(shí)檢測的參數數量。BD FACSAria Fusion 可以支持六根激光器和四個(gè)獨立光斑。選擇多達六根不同波長(cháng)的激光器，并具有同時(shí)進(jìn)行多達20個(gè)參數，18色的檢測能力，有著(zhù)強大的靈活性。

可升級并向下兼容

用戶(hù)可以根據當前和未來(lái)的需求以及預算情況來(lái)配置儀器。以后還可以通過(guò)升級服務(wù)來(lái)增加 BD FACSAria Fusion 的激光器數量，以提升其能力。

更低的使用成本

與空氣中激發(fā)得分選方式相比，BD FACSAria Fusion高效的光學(xué)系統的設計使得使用成本降低。BD FACSAria Fusion 通過(guò)光纖來(lái)傳導固體激光器所發(fā)出的激光，從而實(shí)現了靈敏度和分辨率的。

小顆粒的分辨率

0.3-µm，0.4-µm，0.5-µm，1.0-µm大小的微球在同一管中用 BD FACSAria Fusion 檢測，四個(gè)群體都可以和背景信號清楚地區分。

CFP轉染的Hela細胞

BD FACSAria Fusion 上可以配備445nm激光，它比405nm激光能更有效地激發(fā)CFP蛋白。CFP轉染的Hela細胞可以用445nm和405nm的激光激發(fā)，445nm激發(fā)得到的區分度明顯要高很多。

BD FACSAria III 上收集的實(shí)驗數據

小鼠骨髓SP細胞

小鼠骨髓來(lái)源的細胞用 Hoechst 33342, c-Kit, Sca-1, 和lineage標記，在裝有375nm激光器的 BD FACSAria III上采集數據。BD FACSAria Fusion 上同樣可以配備這根激光器。

SP群體 (紅色) 全是c-Kit+ Sca-1++。

使用的抗體是c-Kit PE, Sca-1 PE-Cy™7, Lineage FITC, CD 34 APC, CD45 APC-Cy7, PI，Hoechst Blue, 和 Hoechst Red。

BD FACSAria III 上收集的實(shí)驗數據

腫瘤細胞株的SP細胞

如散點(diǎn)圖顯示人HT-29結腸癌細胞使用Hoechst 33342染色，裝有375nm激光器的BD FACSAria III上采集數據。BD FACSAria Fusion 上同樣可以配備這根激光器。

作為對照樣本，SP表達被抑制。

BD FACSAria III 上收集的實(shí)驗數據

控制與分析

與其他BD流式細胞分析儀和分選儀兼容

BD FACSAria Fusion 使用 BD FACSDiva 軟件，對儀器設置、數據獲取和數據分析都能夠提供快捷有效的控制。軟件能自動(dòng)完成儀器的主要設置過(guò)程，限度降低人與儀器的直接接觸所可能帶來(lái)的生物安全性的問(wèn)題。

BD FACSDiva 軟件被廣泛地應用于一系列BD的流式細胞分析和分選儀，包括 BD FACSCanto 和 BD LSRFortessa 系統等。研究者的實(shí)驗設計更為靈活方便，可以將優(yōu)化好的實(shí)驗條件和設置快速的轉移到另一平臺上。例如，分析實(shí)驗的條件和設置可以輕松應用于分選實(shí)驗。

分選前的快速簡(jiǎn)單準備:
1.打開(kāi)
2.開(kāi)啟液流
3.自動(dòng)化完成儀器設置、質(zhì)控
     以及液滴延遲優(yōu)化
4.化樣品條件
5. 分選樣本

BD FACSDiva軟件具有儀器設置和追蹤 (CS&T) 功能，能夠幫助儀器完成基線(xiàn)設置，優(yōu)化儀器的靈敏度和熒光分辨率。因此，BD FACSDiva能大幅減少由于操作失誤，確保實(shí)驗結果的一致穩定。它使得用戶(hù)可以在儀器連續穩定的前提下快速完成特定實(shí)驗的條件設置。儀器狀態(tài)追蹤功能會(huì )監測一系列儀器設置的數值，并給出狀態(tài)報告，大大簡(jiǎn)化了日常質(zhì)控的流程。Levey-Jennings圖譜可以幫助用戶(hù)了解他們的儀器狀態(tài)，確定是否需要進(jìn)一步的維護處理。

BD CS&T 軟件系統

數據獲取和分析

BD FACSDiva軟件使得科研工作者能夠使用自動(dòng)的數據獲取流程，去完成多個(gè)數據的預覽和保存。軟件還能夠管理數據獲取模板、實(shí)驗界面設計、以及補償程序，從而方便數據獲取。

為了高效便捷的分析，軟件提供了自動(dòng)設門(mén)方式、用戶(hù)可選的圖形結構和批處理功能。存儲的數據可以通過(guò)圖形、門(mén)、群體層級以及統計結果，在同一張BD FACSDiva工作表上實(shí)現完整分析。通用工作表被保存后，可以用來(lái)分析同一實(shí)驗中的多個(gè)樣本管數據，從而大大節省時(shí)間。有助于提高效率的方式還有：用戶(hù)自定義的批處理分析、自動(dòng)化的設門(mén)調整、在分析不同數據間暫停、輸出統計結果、在進(jìn)到下一個(gè)數據文件前打印結果等等。

索引分選

索引分選使得分選細胞到一個(gè)多維收集裝置如96孔板之后，每一個(gè)位置上的細胞表型是可以再回溯的。每個(gè)細胞落在收集裝置上的位置信息是以X/Y兩維的數據形式被保存下來(lái)的。因此在分選后，收集裝置上的特定位置的細胞可以追蹤其流式表型信息。

數字化電子系統

光膠耦合的石英杯流動(dòng)室和電子處理系統協(xié)同作用可以使每個(gè)檢測顆粒的信息。電子采樣速率和顆粒在流動(dòng)室中的流動(dòng)速度精確匹配。BD FACSAria Fusion每秒70,000個(gè)顆粒的上樣速度下，采集到的數據量和上樣速度線(xiàn)性相關(guān)，并且結果精確。

BD FACSAria Fusion 系統采樣速度

安全防護

BD與Baker共同設計的安全柜，符合生物安全標準且節省空間

流式細胞術(shù)生物安全正在成為越來(lái)越多的重點(diǎn)實(shí)驗室的要求，他們非常關(guān)注操作者偶然暴露在生物樣本中的潛在危險。BD公司于Baker公司合力設計并建立了一個(gè)強大且具有前瞻性的生物安全方案。

在購買(mǎi)BD FACSAria Fusion時(shí)，您可以選擇搭配或者不搭配生物安全柜 (BSC)。因為BD FACSAria Fusion與BSC的銜接嚴絲合縫，如果將來(lái)需要安裝BSC，現場(chǎng)升級安裝將在一天之內完成。

Available without the biosafety cabinet

BD FACSAria Fusion可不選配BSC系統，在日后可快速現場(chǎng)升級安裝。即使BD FACSAria Fusion沒(méi)有配備BSC，密閉的上樣至分選的整個(gè)通路、液流吸引器、選配的AMS也能降低操作員暴露的危險。

對人員、樣本及環(huán)境的保護

BSC用來(lái)保護操作者免受樣本中生物試劑的污染威脅。在與傳染性樣本相關(guān)的實(shí)驗室中，BSC是高效、常用的一級屏障設備中的一員。BSC保護員工和環(huán)境免受有害試劑的傷害，保護樣品 (細胞) 不被污染。

生物安全柜可以控制控制氣流的方向，流量和速度，避免可能有害的顆粒接觸操作著(zhù)。

生物安全標準認證

Baker公司認證為BD FACSAria Fusion定制的生物安全柜符合二級A2型生物安全柜標準和美國衛生設備基金會(huì ) (NSF) 49號國際標準。該生物安全柜同時(shí)符合歐洲12469號標準和澳大利亞AS 2252.2–2009號標準。所有的微生物實(shí)驗都是在集成系統上進(jìn)行，以確保與使用狀態(tài)相同

氣流控制

BSC通過(guò)控制氣流的方向、體積和流速來(lái)引導潛在有害顆粒遠離操作者?？諝饨?jīng)過(guò)過(guò)濾后循環(huán)流動(dòng)于工作站表層，安全柜前方的獨立氣流在操作者與工作站之間產(chǎn)生一道保護屏障。

高效微粒過(guò)濾器 (HEPA) 能夠去除空氣中的微生物和空氣微粒 (氣溶膠)。HEPA過(guò)濾器位于工作區域的空氣入口和出口處。在安全柜消耗和補充空氣的位置也安裝了HEPA過(guò)濾器。安全柜中的HEPA過(guò)濾器可排除至少99.97%的熱生成DOP煙塵顆?；蛘咧睆?.3um以上的顆粒。

BD FACSAria Fusion的氣溶膠處理系統

BD FACSAria Fusion具有一套多重保護控制的氣溶膠處理系統。BD FACSAria Fusion整合的二級A2安全柜確保氣溶膠不外泄，并立即通過(guò)HEPA被吸入BSC的過(guò)濾器中。

為了更好地處理氣溶膠，獨立的氣溶膠處理系統(AMS) 迅速將分選倉中的氣溶膠吸出，并將所有微粒捕獲于專(zhuān)用的AMS HEPA過(guò)濾器中。

另外，氣溶膠處理系統也連接至分選倉區域。從上樣倉至分選收集管的整個(gè)密閉通路都可以分離、捕獲氣溶膠。氣溶膠顆粒將會(huì )被液流吸引器吸出，或者被AMS高效抽走。

多重保護正在成為生物安全防護的重要一環(huán)。有了BD FACSAria Fusion，從上樣到分選的整個(gè)密閉通路、液流吸引器、二級A2生物安全柜以及氣溶膠控制系統，使氣溶膠控制系統高度盈余。由于這些系統是相互獨立的，使得我們可以逐個(gè)測試，保證工作狀態(tài)和保證具有備用保護功能。

多色組合

在BD FACSAria Fusion 流式細胞儀上進(jìn)行10色CD4、CD8記憶和效應細胞與調節性T細胞檢測方案。T亞群的檢測分析可以輕松實(shí)現。