上海沛歐分析儀器有限公司
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上海沛歐分析儀器有限公司
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閱讀：40發(fā)布時(shí)間：2024-10-20
摘要：采用凱氏法測辣木葉提取物中的蛋白質(zhì)含量是國標推薦方法。
關(guān)鍵詞：沛歐全自動(dòng)定氮儀、消化爐、辣木葉蛋白質(zhì)含量
引言：辣木葉為辣木科辣木屬植物的樹(shù)葉，可食用，其營(yíng)養價(jià)值非常豐富，含有大量的蛋白質(zhì)、氨基酸、纖維素及礦物質(zhì)，具有降血糖、降脂、降壓、抗腫瘤、抗氧化、通便、改善睡眠等功效，長(cháng)期食用可增強人體**功能，延緩衰老、預防**，其蛋白質(zhì)的含量直接影響辣木葉的品質(zhì)和營(yíng)養功效，因此對辣木葉提取物蛋白質(zhì)含量的測定具有重要的意義。為此我們使用沛歐全自動(dòng)定氮儀SKD-1000（采用國際通用的顏色法判斷、具有多項磚利技術(shù)）紅外石英消化爐SKD-20S2對辣木葉提取物進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測。
前言:按GB2009.5食品安國內家標準 《食品中蛋白質(zhì)的測定》**法要求測試。
參考文獻：GB2009.5
一、原理
辣木葉提取物樣品在濃硫酸和硫酸銅、硫酸鉀高溫下，把有機的細胞結構破壞，把氮元素氧化成硫酸銨，（為了使得樣品消化時(shí)不產(chǎn)生掛壁，必須采用樣品孔間溫差小和帶程序升溫功能的消化爐，否則會(huì )產(chǎn)生掛壁現象，導致消化失?。┫瓿珊?，需要將樣品冷卻到40℃左右，再把消化管放入定氮儀上。消化管內自動(dòng)添加稀釋液、堿，反應杯內自動(dòng)添加硼酸和顯色劑。對消化管內樣品加熱逸出氨氣和水蒸氣混合液，冷卻流到反應杯內，同時(shí)用標準鹽酸進(jìn)行滴定，直到蒸餾結束和滴定到終點(diǎn)。計量消耗標準鹽酸的體積即可計算辣木葉提取物中蛋白質(zhì)含量。
二、儀器和設備
1. 全自動(dòng)定氮儀SKD-1000（上海沛歐分析儀器有限公司）
2. 消化爐SKD-20S2（上海沛歐分析儀器有限公司）
3. 萬(wàn)分之**平
4. 滴管移液器
5.烘箱
三、試劑、樣品和標準品
1. 標準鹽酸濃度：0.1114 mol/L
2. 40%的氫氧化鈉
3.2%的硼酸+甲基紅和嗅甲酚綠混合的顯色劑（1:3.5）
4.催化劑（硫酸銅:硫酸鉀為1:10的混合物）
5.蒸餾水
6.樣品：辣木葉提取物
7.硫酸銨
四、操作條件和程序
1. 樣品制備
用分析天平依次稱(chēng)取2個(gè)空白，稱(chēng)樣量為：①0.4082 g硫酸銅、3.6037 g硫酸鉀；②0.4045 g硫酸銅、3.6049 g硫酸鉀，5個(gè)辣木葉提取物待測樣品，稱(chēng)樣量為：①0.4061 g硫酸銅、3.6010 g硫酸鉀、0.4058 g辣木葉提取物；②0.4048 g硫酸銅、3.6035 g硫酸鉀、0.4037 g辣木葉提取物；③0.4097 g硫酸銅、3.6060 g硫酸鉀、0.4032 g辣木葉提取物；④0.4069 g硫酸銅、3.6018 g硫酸鉀、0.4096 g辣木葉提取物；⑤0.4047 g硫酸銅、3.6009 g硫酸鉀、0.4011 g辣木葉提取物，將稱(chēng)量好的空白與樣品分別置于標號的消化管中，依次向每個(gè)消化管中加入10 mL硫酸。
2. 樣品消化及消化爐參數設置
將制備好的空白及樣品按序號放入消化爐，蓋上排廢氣裝置，打開(kāi)抽氣泵上水龍頭開(kāi)關(guān)（前三個(gè)階段水流要大，使釋放出大量廢氣能及時(shí)排除，第四階段水流開(kāi)小以避免酸霧排出），然后進(jìn)行消化爐溫度-時(shí)間曲線(xiàn)參數設置：135度（20分鐘）--190度（25分鐘）---350度（5分鐘）----400度（70分鐘），消化爐根據時(shí)間-溫度曲線(xiàn)自動(dòng)升溫和保溫，直到消化結束。把消化架取下放在冷卻架上，冷卻到40℃左右。
3.凱氏定氮儀儀器回收率測定
用分析天平精密稱(chēng)量已烘干的硫酸銨（125 ℃烘箱烘2h）2份，稱(chēng)樣量為：0.1041 g、0.115 g，分別置于標號的消化管中，然后在凱氏定氮儀儀器上進(jìn)行測定參數設置進(jìn)行測定，參數設置為：堿10 mL、稀釋液20 mL、樣品0.1041g和0.115g、滴定酸為鹽酸、標準酸濃度為0.1114 mol/L、定時(shí)6 min、系數1、名稱(chēng)硫酸銨1和硫酸銨2，參數設置完畢后，點(diǎn)擊屏幕上的測試程序中的調取，*后點(diǎn)擊樣品測試選項即可進(jìn)行測試，測試完畢后查看兩次平行測定的含氮和消耗酸的數據是否正常，依次來(lái)判定該儀器運行是否正常。
4.凱氏定氮儀參數設置
打開(kāi)凱氏定氮儀顯示屏，點(diǎn)擊參數設置，依次輸入堿45 mL、稀釋液40mL、樣品克數、標準酸濃度0.11414 mol/L、定時(shí)6 min、樣品名稱(chēng)、系數6.25，總共測5個(gè)樣品，因此要依次設置5次，一并保存，即可自動(dòng)測定。
5.樣品蛋白質(zhì)測定
參數設置完后，便可將對應標號的空白和樣品的消化管接到儀器對應位置，先測空白，再依次測樣，測定數據依次自動(dòng)保存在儀器硬件盤(pán)中，測完查詢(xún)記錄即可。
6.計算公式
蛋白質(zhì)含量計算公式x%=6.38×1.401(v-v0)c/m
氮含量計算公式y%=1.401(v-v0)c/m
x%---------蛋白質(zhì)含量
y%---------氮含量
v--------消耗標準酸體積（ml)
V0------空白消化標準酸體積(ml)
C--------標準酸濃度（mol/L)
m--------樣品質(zhì)量(ｇ)
質(zhì)控品采用烘干的分析純（99%）硫酸氨，硫酸銨理論含氮量21.21%
| 辣木葉1 |
辣木葉2
|
辣木葉3
|
辣木葉4
|
辣木葉 5
|
硫酸氨 1
|
硫酸氨 2
| |
| 消耗標準酸（ml) | 3.795 | 3.77 | 3.656 | 3.696 | 3.620 | 14.174 | 15.109 |
| 蛋白質(zhì)含量(%) | 9.1225 | 9.1262 | 8.8450 | 8.8018 | 8.8037 | ----------- | ----------- |
| 含氮量(%) | ------------- | ------------ | -------------- | -------------- | -------------- | 21.2503 | 21.1487 |
| 空白消耗標準酸體積（ul) | 551 | 551 | 551 | 551 | 551 | 247 | 247 |
結果分析:本次測試數據符合要求，數據可靠。
附：5009.5-2010 《食品安國內家標準食品中蛋白質(zhì)的測定》
注意事項：
辣木葉提取物在取樣時(shí)注意均勻性，在消化樣品時(shí)，尤其是含糖、油脂的樣品容易起泡產(chǎn)生樣品掛壁，這時(shí)消化爐要有程序升溫功能，孔間溫差要小，避免樣品溫差所產(chǎn)生的升溫不協(xié)調而使樣品掛壁。
定氮儀要有足夠大的蒸餾功率，以便盡可能蒸餾出氨氣，提升回收率。如果全自動(dòng)定氮儀則采用顏色法終點(diǎn)判斷的方法，保障數據準確性和儀器的線(xiàn)性度。
儀器安裝現場(chǎng)圖
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