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更新時(shí)間：2025-01-06 20:50:34瀏覽次數：28次
聯(lián)系我時(shí)，請告知來(lái)自 紡織服裝機械網(wǎng)（貨號：WLRN8206KIT）原理概述：本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù)：在常溫恒溫下，特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物和模板RNA合成cDNA鏈，反應體系中的重組酶、單鏈DNA結合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴增反應
（貨號：WLRN8206KIT）
原理概述：
本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù)：在常溫恒溫下，特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物和模板RNA合成cDNA鏈，反應體系中的重組酶、單鏈DNA結合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴增反應。依賴(lài)nfo酶的作用，加入根據模版設計的特異的分子探針，使用膠體金技術(shù)（三明治夾心法）可以對最終結果進(jìn)行檢測。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時(shí)間短（僅需12 mins）等優(yōu)點(diǎn)，反應組分為干粉狀態(tài)，操作簡(jiǎn)便，易于保存。
本試劑對設備要求低，金屬浴、水浴鍋等即可進(jìn)行反應操作，無(wú)需購買(mǎi)PCR擴增儀等價(jià)格高昂的專(zhuān)屬設備。
引物設計：
建議使用長(cháng)度在 30-35 bp的引物，引物過(guò)短會(huì )影響擴增速度和檢測靈敏度；下游引物的5’端標記一個(gè)修飾基團（常用）。引物設計避免形成二級結構而影響擴增；擴增子長(cháng)度建議在150-300 bp，通常不超過(guò)500 bp。
熒光探針設計：
在上下游引物中間，設計一段長(cháng)度為46-52nt與目的片段互補的序列；5’端修飾一個(gè)抗原標記（典型FAM）; 在5’端和3’末端的中部位置標記一個(gè)dSpacer（四氫呋喃，THF），作為nfo的識別位點(diǎn)；3’末端標記一個(gè)修飾基團，例如胺基、磷酸基團或C3-Spacer等。
試劑盒組成：
| 組成 | 含量 |
| A buffer | 1.6 mL×1管 |
| B buffer | 150 μL×1管 |
| 試劑 | 48份 |
| 使用說(shuō)明書(shū) | 1份 |
試劑盒儲存：
運輸條件：低溫運輸；
儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 oC，避光保存，避免重壓、反復凍融；
產(chǎn)品有效期：12個(gè)月。
操作步驟：提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。
1) 每個(gè)干粉反應管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需融化混勻，否則會(huì )對實(shí)驗效果產(chǎn)生影響）；
2) 每個(gè)反應管分別加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探針（引物和探針濃度為10 μM，對于多個(gè)反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中）；
3) 向反應管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根據核酸濃度調整加入的核酸模板體積，并相應調整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為13.5 μL）；
4) 最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（對于多個(gè)反應，建議將B buffer加至反應管的蓋子內側，上下顛倒反應管8-10次混勻）；
5) 混勻后，將反應液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應管放入恒溫設備中37-39 oC孵育8-12 mins；
6) 反應結束后，取10 μL加入含有190 μL ddH2O的離心管中，混合均勻后，將膠體金試紙條的樣品端插入離心管中平衡，5 mins內觀(guān)察質(zhì)控線(xiàn)與檢測線(xiàn)判讀結果。
體系配制
| 組分 | 體積（μL） |
| A buffer | 29.4 |
| 上游引物(10 μM) | 2 |
| 下游引物(10 μM) | 2 |
| 探針(10 μM) | 0.6 |
| ddH2O和核酸模板 | 13.5 |
| B buffer | 2.5 |
| 總體積 | 50 |
注意事項：
1． 由于試劑盒靈敏度非常高，在進(jìn)行反應時(shí)請注意避免微量核酸染，并盡量考慮設置空白對照以確認是否有核酸污染。
2． 試劑盒保質(zhì)期12個(gè)月。每次使用時(shí)，請取出實(shí)驗所需的MIRA反應單元的數量，置于冰浴條件下并在8小時(shí)內使用；剩余部分，請置于存儲條件下。
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