北京立博泰業(yè)科技有限公司
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更新時(shí)間：2025-01-06 21:15:59瀏覽次數：40次
聯(lián)系我時(shí)，請告知來(lái)自 紡織服裝機械網(wǎng)（貨號：WLRB8207KIT）原理概述：本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù)：在恒溫條件下（42°C），特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈，反應體系中的重組酶、單鏈DNA結合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴增反應
（貨號：WLRB8207KIT）
原理概述：
本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù)：在恒溫條件下（42 °C），特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈，反應體系中的重組酶、單鏈DNA結合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴增反應。適用于實(shí)驗室級別的RNA擴增以及其他檢測用途的RNA擴增使用。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時(shí)間短（僅需30 mins）等優(yōu)點(diǎn)，反應組分為干粉狀態(tài)，操作簡(jiǎn)便，易于保存。
本試劑對設備要求低，金屬浴、水浴鍋等即可進(jìn)行反應操作，無(wú)需購買(mǎi)PCR擴增儀等價(jià)格高昂的專(zhuān)屬設備。
引物設計：
建議使用長(cháng)度在 30-35 bp的引物，引物過(guò)短會(huì )影響擴增速度和檢測靈敏度；引物設計避免形成二級結構而影響擴增；擴增子長(cháng)度建議在150-500 bp。
試劑盒組成：
| 組成 | 含量 |
| A buffer | 1.6 mL×1管 |
| B buffer | 150 μL×1管 |
| 試劑 | 48份 |
| 使用說(shuō)明書(shū) | 1份 |
試劑盒儲存：
運輸條件：低溫運輸；
儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 oC，避光保存，避免重壓和反復凍融；
產(chǎn)品有效期：14個(gè)月。
操作步驟：提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。
1) 每個(gè)干粉反應管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需融化混勻，否則會(huì )對實(shí)驗效果產(chǎn)生影響）；
2) 每個(gè)反應管分別加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物濃度10 μM，對于多個(gè)反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中）；
3) 向反應管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根據核酸濃度調整加入的核酸模板體積，并相應調整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為14.1 μL）;
4) 最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（（請務(wù)必上下顛倒甩動(dòng)反應管8-10次進(jìn)行混勻；對于多個(gè)反應，建議將B buffer加至反應管的蓋子內側上下顛倒后混勻）；
5) 混勻后，將反應液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應管放入恒溫設備中42 oC孵育30 mins；
6) 反應結束后，加入Tris飽和酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）抽提液，1:1混勻抽提反應液，12000 rpm離心5 mins，取5 μL上清進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。（注：不建議用高溫變性法去蛋白，高溫變性并不能起到有效去除蛋白的效果，還是會(huì )對電泳分析產(chǎn)物造成影響。也不推薦用市面上銷(xiāo)售產(chǎn)物純化試劑盒對反應產(chǎn)物進(jìn)行純化后再電泳。很多品牌的純化試劑盒無(wú)法達到預期效果，容易造成假陰性。）
體系配制
| 組分 | 體積（μL） |
| A buffer | 29.4 |
| 上游引物(10 μM) | 2 |
| 下游引物(10 μM) | 2 |
| ddH2O和RNA模板 | 14.1 |
| B buffer | 2.5 |
| 總體積 | 50 |
注意事項：
1． 由于試劑盒靈敏度非常高，在進(jìn)行反應時(shí)請注意避免核酸污染，并設置空白對照；
2． 使用時(shí)請取出實(shí)驗所需的MIRA反應單元的數量，剩余部分請置于存儲條件下。
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