北京立博泰業(yè)科技有限公司
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更新時(shí)間：2025-01-06 21:20:06瀏覽次數：35次
聯(lián)系我時(shí)，請告知來(lái)自 紡織服裝機械網(wǎng)（貨號：WLB5001）原理概述：本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù)：在常溫恒溫下，重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復合體Rec/ssDNA，在輔助蛋白和單鏈結合蛋白SSB的幫助下，侵入雙鏈DNA模板
（貨號：WLB5001）
原理概述：
本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù)：在常溫恒溫下，重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復合體Rec/ssDNA，在輔助蛋白和單鏈結合蛋白SSB的幫助下，侵入雙鏈DNA模板；在侵入位點(diǎn)形成D-loop區域，并開(kāi)始對DNA雙鏈進(jìn)行掃描；待找到與引物互補的目的區域后，復合體Rec/ssDNA解體的同時(shí)，聚合酶也結合到引物的3’末端，開(kāi)始鏈的延伸。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時(shí)間短（僅需30 mins）等優(yōu)點(diǎn)。金屬浴、水浴鍋等即可進(jìn)行反應操作，無(wú)需購買(mǎi)PCR擴增儀等價(jià)格高昂的設備。
引物設計：
建議使用長(cháng)度在30-35 bp的引物，引物過(guò)短會(huì )影響擴增速度和檢測靈敏度；引物設計避免形成二級結構而影響擴增；擴增子長(cháng)度建議在150-300 bp，通常不超過(guò)500 bp。
試劑盒組成：
| 組成 | 含量 |
| C buffer | 1mL×2管 |
| L buffer | 500 μL×1管 |
| P-core | 1.2 mL×1管 |
| B buffer | 300 μL×1管 |
| 使用說(shuō)明書(shū) | 1份 |
試劑盒儲存：
運輸條件：低溫運輸；
儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 oC，避光保存，避免重壓，避免反復凍融。
產(chǎn)品有效期：6個(gè)月。
操作步驟：提前將試劑盒所需組分取出，冰上或低溫下融化（C buffer可室溫融化），震蕩混勻。
1) 向無(wú)菌0.2mL PCR管中加入20 μL C buffer、5 μL L buffer；
2) 加入2 μL上游引物、2 μL下游引物；
3) 加入1.5μL dNTPs；
4) 向反應管中加入12 μL P-core（步驟1~4可以混合后再分裝至反應管中）；
5) 向反應管中加入2.5μL ddH2O和2.5 μL核酸模板（可根據核酸濃度和實(shí)驗需求調整加入的核酸模板體積，并相應調整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為5 μL）；
6) 最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（加入B buffer反應立即被啟動(dòng)）；上下顛倒混勻后（請務(wù)必保證充分混勻），將反應液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應管放入恒溫設備中：37~42 oC恒溫孵育，時(shí)間30 mins；
7) 反應結束后，如需進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測，請加入50 μL酚/氯仿，1:1抽提反應液，12000 rpm離心5 mins，取5 μL上清進(jìn)行電泳檢測。
體系配制
| 組分 | 體積（μL） |
| C buffer | 20
5 |
| L buffer | |
| P-core | 12 |
| dNTPs(10 mM) | 1.5 |
| 下游引物(10 μM) | 2 |
| 下游引物(10 μM) | 2 |
| ddH2O和DNA模板 | 5 |
| B buffer | 2.5 |
| 總體積 | 50 |
|
注意事項：
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