手把手教你如何玩轉分光光度法

　　　　分光光度計是利用分光光度法，通過(guò)測定被測物質(zhì)在特定波長(cháng)處或一定波長(cháng)范圍內光的吸收度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。根據分光元件的不同，分為棱鏡式和光柵式分光光度計；根據儀器結構分為單光束、準雙光束、雙光束和雙波長(cháng)分光光度計；根據光源發(fā)射的光線(xiàn)波長(cháng)不同分為可見(jiàn)光、紫外-可見(jiàn)光、紅外、熒光、原子吸收光和火焰分光光度計等。
　　一、分光光度法的特點(diǎn)：
　　有色物質(zhì)對光的吸收具有選擇性。它呈現的顏色與被吸收的光線(xiàn)的顏色互為補色，如果要確定某種溶液選擇吸收的特定波長(cháng)一般可以先用UV掃一下，確定zui大波長(cháng)，也可以根據實(shí)際試樣通過(guò)查文獻來(lái)確定zui大波長(cháng)。
　　對任何一種有色溶劑，都可以測定出它的吸收光譜，UV的分光精度越高，作出的光吸收曲線(xiàn)的精度越高，光吸收程度zui大處的波長(cháng)也就是zui大吸收波長(cháng)。溶液濃度不同時(shí)，光吸收曲線(xiàn)的形狀相同，其zui大吸收波長(cháng)不變，只是吸光度大小不同。我們在測定時(shí)一般用zui大吸收波長(cháng)作為測定波長(cháng)。如圖1所示：不同濃度溶液的吸光度不同，但是zui大吸收波長(cháng)都是在525nm。
　　另外，吸光度具有加合性，在某一入射波長(cháng)下，溶液中含有多種對光產(chǎn)生吸收的物質(zhì)，那么該溶液對該波長(cháng)光的吸光度A總應等于溶液中每一種成分的吸光度之和。這一性質(zhì)對多組分的測定極為有利。
　　二、分光光度法應用領(lǐng)域：
　　高含量組分測定-示差法當待測組分含量較高時(shí)，測得的吸光度值常常偏離朗伯-比爾定律。即使不發(fā)生偏離，也因為通常采用純溶劑作參比溶液（普通光度法），使測得的吸光度太高，超出適宜的讀數范圍而引入較大的誤差。采用示差法就能克服這一缺點(diǎn)。但應用示差法時(shí)，要求儀器光源有足夠的發(fā)射強度或能增大光電流放大倍數，以便能調節參比溶液透光度為99%。這就要求儀器單色器質(zhì)量高，電光學(xué)系統穩定性好。
　　多組分分析應用紫外可見(jiàn)分光光度法，常?？赡茉谕辉嚇尤芤褐胁贿M(jìn)行分離而測定一個(gè)以上組分。假定溶液中同時(shí)存在兩種組分x和y，其吸收光譜一般有重疊和不重疊兩種情況。不重疊的測定組分相互不產(chǎn)生干擾。若吸收光譜重疊，在波長(cháng)為λ1和λ2時(shí)分別測定吸光度A1和A2，由吸光度值的加和性得到聯(lián)立方程，通過(guò)解聯(lián)立方程求得各濃度值。
　　三、分光光度法的一般檢測項：
　?。?）儀器靈敏度的檢查。配置含鉻10mg/l重鉻酸鉀溶液，在440nm下以水作為參比溶液，測其吸光度不得＜0.01。
　?。?）儀器重復性的檢查。在相同的工作條件下用同一溶液重復測量，其百分透光率讀數zui大誤差不得超過(guò)0.5。
　?。?）波長(cháng)準確度的校驗。當儀器使用一段時(shí)間后，必須對波長(cháng)讀數進(jìn)行校正。
　?。?）更換燈泡。換燈泡時(shí)要戴手套，換后要仔細上下調正其位置，使其光斑聚焦在入射狹縫正中處。