血球計數板
,是指—種常見(jiàn)的生物學(xué)工具。用以對人體內紅、白細胞進(jìn)行顯微計數,也常用于計算一些細菌、真菌、酵母菌等微生物的數量。是一塊特制的厚型載玻片,載玻片上有四個(gè)凹槽,構成三個(gè)平臺。中間的較寬平臺被一短橫槽分隔成兩半,每個(gè)半邊上面各刻有一小方格網(wǎng),每個(gè)方格網(wǎng)共分九個(gè)大格,的一大格作為計數用,稱(chēng)為計數區。
計數區的刻度有兩種:一種是計數區分為16個(gè)大方格(大方格用三線(xiàn)隔開(kāi)),而每個(gè)大方格又分成25個(gè)小方格;另一種是一個(gè)計數區分成25個(gè)大方格(大方格之間用雙線(xiàn)分開(kāi)),而每個(gè)大方格又分成16個(gè)小方格。但是不管計數區是哪一種構造,它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),即計數區都由400個(gè)小方格組成。
注意事項:
1.鏡檢計數室。因前一次清洗不到位,或者保存過(guò)程中存在污染,更或者因操作不當導致的計數室存在劃痕,若不及時(shí)清洗或更換,則會(huì )對后期實(shí)驗計數產(chǎn)生極大影響。所以,在每次使用血球計數板之前都需要加一步鏡檢計數室,如若在鏡檢時(shí)發(fā)現計數室有污物,則需按要求清洗并吹干后再進(jìn)行實(shí)驗。
2. 搖勻后取液。在吸出培養液進(jìn)行計數之前,需輕輕震蕩試管,使菌體分布均勻,防止聚沉淀,從而提高計數的代表性和準確性。
3. 先蓋血蓋片后加菌液。在菌懸液搖勻后,應先在血球計數板上蓋上血蓋片,再用滴管吸取少許菌懸液,從計數區中間平臺沿血蓋片的上邊緣滴入一小滴菌懸液,利用液體的表面張力一次性充滿(mǎn)計數區。若先加菌液再覆蓋血蓋片,則容易因為菌液加入過(guò)多,而導致血蓋片未與血球計數板支持柱接觸,血蓋片浮于菌液上方而導致計數偏大,同時(shí)會(huì )因為有氣泡產(chǎn)生而導致計數偏小。
4. 靜置片刻再計數。靜置5 min,待菌懸液不再漂浮流動(dòng),酵母菌全部沉降后再將血球計數板放到顯微鏡下進(jìn)行計數。先在低倍鏡下找到需要觀(guān)察計數的大方格及中方格,將中方格移到視野,然后撥動(dòng)轉換器移至高倍鏡進(jìn)行計數。
5. 高倍鏡下調亮度。低倍鏡下,用平面鏡和小光圈,可以清晰地看到血球計數板上的酵母菌。但是,撥動(dòng)轉換器換到高倍鏡后,即使是用了平面鏡和小光圈,視野里往往還是白茫茫一片,什么都看不見(jiàn),這時(shí)候可以嘗試操作遮光器上的金屬遮光片進(jìn)行遮光處理。因為活的酵母菌和培養液的折光率相近,所以要在高倍鏡下將視野調得暗一些。
6.掌握計數原則。一般選擇觀(guān)察的菌液濃度控制在每個(gè)小方格內有4或5個(gè)菌體為宜,若其濃度太高,可適當稀釋?zhuān)徊⒉捎谩坝嬌喜挥嬒?,計左不計?的計數原則。
