產(chǎn)品詳細介紹:
NanoPro 1000信號轉導蛋白磷酸化分析系統
在細胞生物學(xué)功能研究中,有許多常規的研究手段,如流式,生物質(zhì)譜,雙向電泳,蛋白芯片等技術(shù)。隨著(zhù)研究的深入,科學(xué)家們特別需求進(jìn)行真正意義上的高靈敏,高精度研究手段,力求通過(guò)一次實(shí)驗,快速發(fā)現更多的信息:鑒定結果更為可信,靈敏度更加提高來(lái)鑒定更多低豐度蛋白,更多的修飾信息,結構信息等。傳統分析技術(shù)具有很多局限性,如雙向凝膠電泳(2DE),對疏水性蛋白、堿性蛋白、特別是低豐度蛋白等無(wú)能為力,成為蛋白質(zhì)組研究的瓶頸; 而質(zhì)譜分析技術(shù)也是由于靈敏度等問(wèn)題,需要大量的樣品等原因,十幾年來(lái)一直對研究低豐度調控蛋白缺乏信心. 傳統蛋白分析技術(shù)所用的蛋白量需來(lái)自成千上萬(wàn)個(gè)細胞。所得結果分辨率及重復性不理想。各種蛋白分析法所需樣品量如下:
質(zhì)譜儀樣品量 100000 個(gè)細胞
細胞儀樣品量:10000 個(gè)細胞
蛋白電泳,樣品量:5000 個(gè)細胞
蛋白芯片樣品量:1000個(gè)細胞
ProteinSimple公司的NanoPro 1000超微量蛋白分析系統為蛋白功能和信號通路研究提供了一個(gè)全新的研究方案。傳統的蛋白研究方法需要成千上萬(wàn)的細胞,而NanoPro 1000系統每次分析僅需要25個(gè)細胞。
并可對超微量珍貴樣品的信號轉導蛋白之特性直接檢測,適用各種樣品包括:
原代細胞
FACS 分選細胞
穿刺抽取之腫瘤細胞
顯微切片組織細胞
分離的干細胞群
NanoPro系統利用的毛細管樣品定位及分析技術(shù),結合毛細管分離及化學(xué)發(fā)光檢測原理進(jìn)行納米級的自動(dòng)化實(shí)驗,避免了人為操作誤差,有效提高檢測結果的精確性和重復性。過(guò)去蛋白檢測儀無(wú)法檢測到的信息,如細胞內控制通路的調控信息,可由此精確測得。
NanoPro技術(shù)被用來(lái)分析信號轉導過(guò)程中所涉及的蛋白構象上的極細微變化。NanoPro1000為結構緊湊的臺式分析系統。
從新的角度分析蛋白調控機制,NanoPro技術(shù)采用等電點(diǎn)電泳的方法將不同構象的蛋白分離。該方法大大推進(jìn)了多個(gè)領(lǐng)域的研究,包括:
藥物開(kāi)發(fā)-篩選激酶抑制劑藥物的作用靶點(diǎn)
生物標記物的發(fā)現和確認-觀(guān)察疾病引起的蛋白構象的細微變化,研究其發(fā)病機制
腫瘤蛋白活性-研究組織和細胞中腫瘤蛋白的調控機制翻譯后修飾的研究-檢測蛋白構象改變引起的等電點(diǎn)極細微的變化
NanoPro 1000將蛋白分離與檢測技術(shù)相結合:
NanoPro將毛細管等電點(diǎn)電泳和化學(xué)發(fā)光免疫測定這兩種常用的蛋白檢測技術(shù)相結合。等電點(diǎn)電泳可將不同構象的蛋白分離。分離后蛋白被儀器固定在毛細管壁上,接著(zhù)用化學(xué)發(fā)光免疫的方法檢測蛋白。這為信號轉導蛋白的檢測提供了新的視角。
操作流程
上樣
每個(gè)毛細管中加400nl樣本混合物,包括樣本、熒光標記PI和兩性電解質(zhì)。
分離
毛細管兩端加電壓,樣本中的蛋白質(zhì)隨著(zhù)自身等電點(diǎn)的不同,加以分離。
固定
毛細管在紫外光照射下,其毛細管壁上的化學(xué)物質(zhì)被激活,從而將分離的蛋白異構體固定在毛細管壁上。
免疫標記
用洗脫液將非特異結合的蛋白質(zhì)洗脫,將固定的蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫反應,加入發(fā)光催化劑誘導其化學(xué)發(fā)光,發(fā)光信號被CCD攝像機拍攝下來(lái)。
結果分析
通過(guò)專(zhuān)業(yè)的軟件,對結果進(jìn)行定量分析